| 逆转录病毒介导DNA修复蛋白在人骨髓细胞中的表达和抗性研究 |
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| 引用本文： | 王季石,夏学鸣,陈子兴,阮长耿.逆转录病毒介导DNA修复蛋白在人骨髓细胞中的表达和抗性研究[J].中华实验和临床病毒学杂志,2001,15(3):265-268. |
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| 作者姓名： | 王季石 夏学鸣 陈子兴 阮长耿 |
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| 作者单位： | 苏州医学院附一院血液科江苏省血研所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号39770331);贵州省科委基金(编号E97-5) |
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| 摘 要： | 目的增强造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率及耐药基因的特性和在造血细胞保护性基因治疗中的作用和意义.方法应用RT-PCR从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,将其克隆于pGEM-T质粒载体并构建了逆转录病毒载体G1Na-MGMT,应用脂质体LipofectAMINE基因转移法将后者导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,以BCNU加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染K562细胞和人造血细胞.应用PCR,Southernblot,RT-PCR,Westernblot及MTT法检测人MGMT基因在细胞中的转移和表达.结果酶切鉴定及DNA测序证实其MGMTcDNA克隆的正确性,脂质体介导方法成功将其导入病毒包装细胞,BCNU加压筛选和乒乓感染法使病毒效价达8.6×106CFU/ml,逆转录病毒载体介导的MGMT基因在K562细胞及人造血细胞中获得有效转移和表达.结论MGMT耐药基因的成功克隆并导入骨髓造血细胞且获高效表达对开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础.
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| 关 键 词： | 逆转录病毒科 鸟嘌呤 DNA修饰甲基酶类 基因表达 造血干细胞 抗药性 |
| 修稿时间： | 2000年4月28日 |
Expression and drug resistance of human MGMT gene in hemopoietic cells mediated by bicistronic retroviral vector |
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| WANG Jishi,XIA Xueming,CHEN Zixing,et al..Expression and drug resistance of human MGMT gene in hemopoietic cells mediated by bicistronic retroviral vector[J].Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology,2001,15(3):265-268. |
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| Authors: | WANG Jishi XIA Xueming CHEN Zixing |
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| Institution: | Jiangsu Institute of Hematology, First Affiliated Hospital of Suzhou Medical College, Suzhou 215006, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Retroviridae Guanine DNA modification methylases Gene expression Hemopoietic stem cells Drug resistance |
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