CD4+CD25+ T细胞的扩增及其功能分析*☆

背景：CD4+CD25+ T细胞增殖能力低，且在人外周血中仅占单个核细胞的4%左右。若能在体外高效扩增CD4+CD25+ T细胞，并保持其免疫调节特性，将会对临床移植产生积极的影响。目的：观察C57BL/6小鼠来源的CD4+CD25+ T细胞体外增殖情况及其扩增后的功能变化。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-10/2008-05在南方医科大学珠江医院血液科完成。材料：SPF级C57BL/6及BALB/C雄性小鼠购自南方医科大学动物所。小鼠白血病细胞EL9611由珠江医院血液科惠赠。方法：利用免疫磁珠法分选小鼠CD4+CD25+ T细胞；以抗鼠 CD3ε单抗、抗鼠CD28单抗、鼠重组白细胞介素2及辐射过的BALB/C小鼠脾细胞为共刺激因子，通过实时定量RT-PCR检测扩增后CD4+CD25+ T细胞FoxP3基因mRNA表达变化，以确定增殖效率；3H-TdR掺入法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的影响；LDH释放法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞杀伤小鼠白血病细胞EL9611的影响，以CD4+CD25-T细胞为效应细胞，以EL9611细胞为靶细胞。结果：经免疫磁珠分选可获得高纯度及较强活性的CD4+CD25+ T细胞。扩增后CD4+CD25+T细胞FoxP3基因mRNA的表达平均为扩增前的5.46倍，最高可达14.39倍。扩增后CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖，且随着CD4+CD25+T细胞数的增加，这种抑制增殖的能力也逐渐增强，当两者比例为1:1时抑制率最大，达62.05%。与单纯CD4+CD25- T细胞对EL9611细胞杀伤率比较，效靶比为10:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率无明显变化（t=2.199，P > 0.05）；效靶比为5:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率则明显降低（t=5.839，P < 0.05）。结论：单抗加异源性抗原能有效扩增CD4+CD25+T细胞；扩增后的CD4+CD25+T细胞比新鲜分离的CD4+CD25+T细胞能更有效地抑制CD4+CD25-T细胞的增殖，其对CD4+CD25-T细胞杀伤白血病细胞的作用则取决于其与CD4+CD25-T细胞的相对比例。

Expansion and function analysis of CD4+CD25+ T cells