CD4+CD25+ T细胞的扩增及其功能分析*☆ |
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引用本文: | 曹东林,陈伟,王玲. CD4+CD25+ T细胞的扩增及其功能分析*☆[J]. 中国神经再生研究, 2009, 13(1): 153-156 |
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作者姓名: | 曹东林 陈伟 王玲 |
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作者单位: | 南方医科大学基因工程研究所,广东省第二人民医院血液科,广东省第二人民医院血液科 |
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基金项目: | 广州市科技计划资助项目(2005Z3-E0371) |
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摘 要: | 背景:CD4+CD25+ T细胞增殖能力低,且在人外周血中仅占单个核细胞的4%左右。若能在体外高效扩增CD4+CD25+ T细胞,并保持其免疫调节特性,将会对临床移植产生积极的影响。目的:观察C57BL/6小鼠来源的CD4+CD25+ T细胞体外增殖情况及其扩增后的功能变化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-05在南方医科大学珠江医院血液科完成。材料:SPF级C57BL/6及BALB/C雄性小鼠购自南方医科大学动物所。小鼠白血病细胞EL9611由珠江医院血液科惠赠。方法:利用免疫磁珠法分选小鼠CD4+CD25+ T细胞;以抗鼠 CD3ε单抗、抗鼠CD28单抗、鼠重组白细胞介素2及辐射过的BALB/C小鼠脾细胞为共刺激因子,通过实时定量RT-PCR检测扩增后CD4+CD25+ T细胞FoxP3基因mRNA表达变化,以确定增殖效率;3H-TdR掺入法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的影响;LDH释放法检测扩增后的CD4+CD25+ T细胞对CD4+CD25-T细胞杀伤小鼠白血病细胞EL9611的影响,以CD4+CD25-T细胞为效应细胞,以EL9611细胞为靶细胞。结果:经免疫磁珠分选可获得高纯度及较强活性的CD4+CD25+ T细胞。扩增后CD4+CD25+T细胞FoxP3基因mRNA的表达平均为扩增前的5.46倍,最高可达14.39倍。扩增后CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,且随着CD4+CD25+T细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也逐渐增强,当两者比例为1:1时抑制率最大,达62.05%。与单纯CD4+CD25- T细胞对EL9611细胞杀伤率比较,效靶比为10:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率无明显变化(t=2.199,P > 0.05);效靶比为5:1时扩增后的CD4+CD25+ T细胞联合CD4+CD25- T细胞的杀伤率则明显降低(t=5.839,P < 0.05)。结论:单抗加异源性抗原能有效扩增CD4+CD25+T细胞;扩增后的CD4+CD25+T细胞比新鲜分离的CD4+CD25+T细胞能更有效地抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,其对CD4+CD25-T细胞杀伤白血病细胞的作用则取决于其与CD4+CD25-T细胞的相对比例。
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关 键 词: | T细胞;体外增殖;功能 |
Expansion and function analysis of CD4+CD25+ T cells |
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Abstract: | |
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Keywords: | 123 |
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