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狂犬病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立和阳性对照的制备
引用本文:王云龙,赵瑞红,李智涛,李玉林,王国强,沈飞. 狂犬病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立和阳性对照的制备[J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 2008, 22(6)
作者姓名:王云龙  赵瑞红  李智涛  李玉林  王国强  沈飞
作者单位:1. 郑州职业技术学院生物工程系,453007
2. 河南师范大学生命科学学院
3. 河南省生物工程技术研究中心
基金项目:河南省重点科技攻关项目 
摘    要:目的 建立狂犬病病毒实时荧光定量PCR检测方法,制备狂犬病病毒(rabies virus,RV)的假病毒颗粒阳性对照.方法 在RV的N基因保守区设计引物和探针,建立反转录实时荧光定量PCR检测方法,克隆得到噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因(MS2),将其重组到质粒pET-28b(+)中,再将RV的N基因片段重组到MS2下游,经原核表达得到RV假病毒颗粒.结果 实时荧光定量PCR检测RV重组质粒最低检测限为15拷贝/μl,重组表达质粒经原核表达可形成耐RNase的RV病毒样颗粒.结论 建立了反转录实时荧光定量PCR检测RV核酸的方法,成功构建了可耐受RNase且无传染性的RV阳性对照.

关 键 词:聚合酶链反应  狂犬病病毒  假病毒颗粒

Establishment of a fluorescent quantitative PCR detection method for rabies virus and preparation of RNA positive controls
WANG Yun-long,ZHAO Rui-hong,LI Zhi-tao,LI Yu-lin,WANG Guo-qiang,SHEN Fei. Establishment of a fluorescent quantitative PCR detection method for rabies virus and preparation of RNA positive controls[J]. Chinese journal of experimental and clinical virology, 2008, 22(6)
Authors:WANG Yun-long  ZHAO Rui-hong  LI Zhi-tao  LI Yu-lin  WANG Guo-qiang  SHEN Fei
Abstract:
Keywords:Polymerase chain reaction  Rabies Virus  Virus-Like Particles
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