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| 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定 | |
| 引用本文： | Bai Y,Yu LZ,Lü YQ,Ai JK,Zhou LJ,Zhang CL,Wang Y. 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定[J]. 中华医学杂志, 2003, 83(4): 333-337 |
| 作者姓名： | Bai Y Yu LZ Lü YQ Ai JK Zhou LJ Zhang CL Wang Y |
| 作者单位： | 1. 100034,北京大学泌尿外科研究所,北京大学第一医院泌尿外科 2. 解放军海军总医院中心实验室 3. 100034,北京大学泌尿外科研究所,北京大学第一医院同位素科 |
| 摘 要： | 目的 探讨人-鼠嵌合抗体ch-BD1体内和体外的表达和功能。方法 用分子生物学方法得到系列弱化表达的双氢叶酸还原酶(DHFR)基因片段,将其克隆入载体pDHL-BD1中构建得系列弱化表达DHFR基因的人-鼠嵌合抗体pWSD1-BD1,pWSD2-BD1,和pWSD3-BD1。将这些嵌合抗体以及pDHL-BD1分别转染缺陷表达DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)/DHFR-细胞,以Northern印迹鉴定其DHFR基因表达水平。将不同浓度的氨甲蝶呤(MTX)加入转染细胞的培养液,测定上清中的抗体水平。用 ~(99m)标记纯化的ch-BD1,加入系列稀释的人膀胱癌EJ细胞溶液中,测定结合在细胞上的抗体放射活性,计算标记抗体的亲和常数。将人膀胱癌EJ细胞注射入3只Balb/C小鼠后肢根部,4周后对肿瘤进行放射免疫显像。将标记抗体注射入小鼠尾静脉,分别于2 h,6 h,22 h和24 h后进行放射显像。结果 构建载体的 DHFR基因表达活性由强至弱的顺序为 pDHL-BD1>pWS1-BD1>pWS3-BD1>pWS2-BD1。MTX浓度为10~(-6)mol/L时ch-BD1的表达水平与DHFR基因的基础表达水平明显相关,DHFR基础水平越高抗体的表达水平亦越高。EJ细胞与标记抗体孵育后,ch-BD1的免疫活性分数为76％,亲和常数为3.56×10~9 M~(-1);鼠单抗BD1的免疫活性分数为81％,亲和常数为1.22×10~9M~(-1)。~(99m)标记的ch-BD1经尾静脉 |
| 关 键 词： | 膀胱肿瘤 嵌合抗体 真核表达载体 CHO细胞 |
| 修稿时间： | 2002-05-29 |
Expression of human-mouse chimeric antibody ch-BD1 and its affinity to human bladder cancer in vitro and in vivo |
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| Bai Yin,Yu Li-zhang,Lü Ying-qian,Ai Jun-kui,Zhou Li-jun,Zhang Chun-li,Wang Yan. Expression of human-mouse chimeric antibody ch-BD1 and its affinity to human bladder cancer in vitro and in vivo[J]. Zhonghua yi xue za zhi, 2003, 83(4): 333-337 | |
| Authors: | Bai Yin Yu Li-zhang Lü Ying-qian Ai Jun-kui Zhou Li-jun Zhang Chun-li Wang Yan |
| Affiliation: | Institute of Urology, Peking University, Beijing 100034, China. |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bladder neoplasm Chimeric antibody Eukaryotic expression vector CHO cells |
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