| 摘 要： | 目的:利用CQ(chloroquine,CQ)及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)诱导Cal-27细胞,探讨自噬在口腔鳞癌上皮间充质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用和机制。方法:应用TGF-β(transforming growth factor,TGF-β)诱导Cal-27细胞发生EMT。同时应用RAPA增强细胞自噬水平,应用CQ抑制细胞自噬水平。应用细胞划痕实验分布检测诱导后细胞迁移能力的改变;Transwell小室实验分别检测诱导后细胞的迁移能力。Western blot检测诱导3 d后ZO-1,vimentin,FN1等EMT相关蛋白水平的变化;统计软件进行分析。结果:以5 ng/mLTGF-β诱导Cal-27细胞3 d,E-cadherin明显下降,Vimentin明显上升,说明建立EMT模型成功。与空白组相比较,以5 ng/mLTGF-β诱导Cal-27细胞3 d后,划痕愈合率明显上升(P<0.05),穿模细胞数明显增多(P<0.05);继而分别以100 ng/mLRAPA和100 ng/mLCQ与5 ng/mLTGF-β共同诱导Cal-27细胞3 d,与TGF-β组相比较,RAPA共诱导组划痕愈合率明显下降(P<0.05),穿膜细胞数明显减少(P<0.05);与TGF-β组相比较,CQ共诱导组划痕愈合率明显升高(P<0.05),穿膜细胞数明显增多(P<0.05);与空白组相比较,以5 ng/mLTGF-β诱导Cal-27细胞3 d后,FN1、Vimentin表达量升高,ZO-1表达量降低;继而分别以100 ng/mL RAPA和100 ng/mLCQ与5 ng/mLTGF-β共同诱导Cal-27细胞3 d,与TGF-β组相比较,RAPA共诱导组FN1、Vimentin表达量降低,ZO-1表达量升高;与TGF-β组相比较,CQ共诱导组FN1、Vimentin表达量升高,ZO-1表达量降低。结论:TGF-β可以诱导Cal-27细胞建立EMT模型。在EMT模型中,促进自噬可以抑制EMT转化,抑制自噬可以促进EMT转化。
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