| 问号钩端螺旋体血清群LipL41基因型分析及其表达产物的免疫学鉴定 |
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| 引用本文： | 丁威,严杰,毛亚飞.问号钩端螺旋体血清群LipL41基因型分析及其表达产物的免疫学鉴定[J].中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(11):859-865. |
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| 作者姓名： | 丁威 严杰 毛亚飞 |
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| 作者单位： | 310031,杭州,浙江大学医学院病原生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39970678) |
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| 摘 要： | 目的 确定我国15群15株问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株和2群2株双曲钩体国际标准株携带LipL41基因情况，构建该基因的原核表达系统，鉴定表达产物的免疫原性。方法 常规酚—氯仿法提取上述17株钩体基因组DNA，高保真PCR扩增全长LipL41基因片段，T—A克隆后测序分型。构建LipL41基因原核表达系统，SDS-PAGE检测重组目的蛋白(rLipL41)表达情况。分别用钩体属特异性TP/patoe Ⅰ抗原、rLipL41兔抗血清的Western blot鉴定其免疫反应性和抗原性。分别用显微镜凝集试验(MAT)、钩体黏附J774A．1细胞模型检测兔抗rLipL41血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用。结果 15株问号钩体均有LipL41基因，并可分为LipL41／1和LipL41／2两种基因型，2株双曲钩体则否。11个LipL41／1基因和4个LipL41／2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88．61％—88．67％和93．24％—97．18％。所构建的原核表达系统rLipL41／1和rLipL41／2的表达量分别占钩体总蛋白的30％和40％。rLipL41／1和rLipL41／2均能与TP/patoe Ⅰ抗血清发生结合反应，免疫家兔能产生抗体。rLipL41／1和rLipL41／2兔抗血清对上述15株问号钩体MAT效价为1：8，1：128、1：16～1：2．S6稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附。结论 我国主要的15群问号钩体代表株均有LipL41／1或LipL41／2基因。所构建原核表达系统能高效表达rLipL41／1和rLipL41／2。rLipL41／1和rLipL41／2是具有良好抗原性和免疫反应性、广泛存在于不同血清群问号钩体表面的蛋白抗原。
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| 关 键 词： | 问号钩端螺旋体 LipL41基因 基因型 克隆表达 免疫原性鉴定 免疫保护 |
| 修稿时间： | 2004年5月20日 |
Genotyping of LipL41 genes from Leptospira interrogans serogroups and immunological identification of the expression products |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptospira interrogans LipL4 1 gene Genotype Cloning expression Immunity identifica tion Immunoprotection |
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