用生物素标记探针原位杂交法检测肝组织内HBVDNA

原位杂交法是用直接组织切片检测特定的遗传基因的方法。近年来,通过遗传基因工程单克隆技术获得了高纯度的探针,用切口翻译法获得了活性高的DNA 探针,故应用范围越来越广。可是,目前的方法,通常是以新鲜冰冻切片作原料,使用3~H 和~(125)I 标记的DNA 探针,靠自动放射照相术检测。本文作者以福尔马林固定的石蜡包埋组织作原料,用生物素标记DNA 探针进行杂交,通过使用过氧化酶的 ABC 法,检测肝组织内 HBVDNA。原料和方法:分别将4μm 厚的2例经福尔马林固定的 HBeAg 阳性肝硬变患者的尸检肝标本石蜡包埋组织薄切片,贴在用 Denhardt 液处理过的载玻片上,脱石蜡后,用 Carnoy 液再固定。然后作以下前处理:1%三硝基甲苯 X100室温2分钟,0.2N HCI 室温2分钟,2XSSC70℃2分钟,1μg/ml 蛋白酶 K 室温15分钟,