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2a型丙型肝炎病毒5’非编码区的RACE护增及二级结构的分析
引用本文:秦兆习 丛旭 等. 2a型丙型肝炎病毒5’非编码区的RACE护增及二级结构的分析[J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 2002, 16(4): 333-336
作者姓名:秦兆习 丛旭 等
作者单位:[1]东南大学医学院附属徐州医院肝炎科 [2]北京大学人民医院100044
基金项目:国家自然科学基金 (3 9770 684,3 0 170 844 ),国家“十五”科技攻关计划资助 (2 0 0 1BA70 5B0 6)
摘    要:目的:获得真全长中国大陆2a型丙型肝炎病毒(HCV)5’非编码区(5’UTR)cDNA,并分析其一级结构和二级结构,为进一步研究其在HCR复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法:利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)联合限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出1例2a型HCV感染者,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增出一条约800bp的cDNA片段,A-T克隆,用RFLP与PCR鉴定重组子,全自动序列分析仪测定插入子序列,RNAdraw预测二级结构。结果:RACE法获得真全长2a型HCV 5’端序列。5个克隆中,3个克隆含全长5’UTR序列,与HCV-1,HC-C2,HC-J6,HC-J8相比,同源性分别为93.6%-94.4%,92.1%-93.0%,98.8%-99.7%,96.2%-96.5%,与2a型标准株HC-J6相比,21,170,222,247,339位不同,分别为G,A,C,C,T,但这些突变不影响其二级结构。另外2个克隆为5’端缺失突变株,分别缺失54bp和144bp。结论:RACE技术快速、有效、实用,可用效获得病毒基因组的末端序列;依此获得中国大陆2a型HCV的5’UTR cDNA;在感染者血液中存在5’端部分缺失的HCV基因片段。

关 键 词:2a型丙型肝炎病毒 二级结构 丙型肝炎 5‘非编码区 序列分析 cDNA末端快速扩增技术 一级结构
修稿时间:2001-11-28

Amplification of hepatitis C virus 5'' untranslated region gene by RACE and its secondary structure analysis]
Zhaoxi Qin,Xu Cong,Dong Jiang,Minghao Ha,Hongsong Chen,Lai Wei. Amplification of hepatitis C virus 5'' untranslated region gene by RACE and its secondary structure analysis][J]. Chinese journal of experimental and clinical virology, 2002, 16(4): 333-336
Authors:Zhaoxi Qin  Xu Cong  Dong Jiang  Minghao Ha  Hongsong Chen  Lai Wei
Affiliation:Institute of Hepatology, People's Hospital, Beijing University, Beijing 100044, China.
Abstract:
Keywords:
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