| 大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞 |
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| 引用本文： | 唐冬生,刘晋荣,蒋泓,曾芳,龚道元,施振旦,张细权.大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(10):1918-1922. |
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| 作者姓名： | 唐冬生 刘晋荣 蒋泓 曾芳 龚道元 施振旦 张细权 |
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| 作者单位： | 1. 佛山大学医学院医学检验系,广东省佛山市,528000
2. 华南农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖系,广东省广州市,510642 |
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| 摘 要： | 背景:利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染.目的:拟实现大分子BAC载体埘鸡胚原始生殖细胞的转染.设计、时间及地点:基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成.材料:种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件卜孵化68～72 h.BAC-TDN-GID 载体由佛山大学分子生物学实验室保存.方法:以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hlFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大昔抽提.取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养.采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定. 结果:第19期鸡胚件腺原始生殖细胞体外培养48 h呈桑椹状或者椭圆状,72 h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色.分子量达30 kb的大分子转基冈载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48 h可见荧光细胞,表明转染成功.经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基囚hlFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达.结论:实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞.
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| 关 键 词： | 原始生殖细胞 鸡胚 大分子 转基因 |
Macromolecule BAC targeting vector for transfection of chicken embryo primordial germ cells |
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| Tang Dong-sheng,Liu Jin-rong,Jiang Hong,Zeng Fang,Gong Dao-yuan,Shi Zhen-dan,Zhang Xi-quan.Macromolecule BAC targeting vector for transfection of chicken embryo primordial germ cells[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2009,13(10):1918-1922. |
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| Authors: | Tang Dong-sheng Liu Jin-rong Jiang Hong Zeng Fang Gong Dao-yuan Shi Zhen-dan Zhang Xi-quan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | BAC |
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