| 小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 智深深,朱静,田杰,刘官信,鲁荣,林建萍,刘建平. 小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建[J]. 解放军医学杂志, 2011, 36(2): 170-173 |
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| 作者姓名： | 智深深 朱静 田杰 刘官信 鲁荣 林建萍 刘建平 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学儿童医院儿童发育疾病研究教育部重点实验室,重庆,400014
2. 重庆医科大学儿童医院儿童发育疾病研究教育部心血管内科,重庆,400014 |
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| 摘 要： | 目的构建高效沉默小鼠Islet-1基因的慢病毒载体。方法针对小鼠Islet-1基因设计3个RNAi靶序列,合成相应的短发卡RNA(shRNA)寡核苷酸序列(oligo):Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVTHM载体。经PCR和测序方法筛选阳性克隆,抽提阳性克隆质粒经大肠埃希菌扩增后,与其辅助包装质粒共同感染293T细胞制备慢病毒载体,利用斑形成试验测定病毒滴度。感染C3H10T1/2细胞株,以流式细胞仪检测其感染效率、荧光定量PCR检测其干扰效率。结果与正常C3H10T1/2细胞比较,测序及PCR结果显示目的片段插入正确;病毒滴度值为3.87×108TU/ml;慢病毒载体对C3H10T1/2细胞感染效率达90.36%;3个靶点(抑制效率分别为76.8%5、5.1%和11.7%)均有干扰效果,与正常细胞比较,Sh1靶点干扰效果最为显著(76.8%,P<0.05)。结论成功构建高效沉默Islet-1基因慢病毒载体。
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| 关 键 词： | 慢病毒感染 RNA干扰 基因,Islet-1 细胞分化 |
Construction of RNAi lentiviral vector targeting mouse Islet-1 gene |
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| ZHI Shen-shen,ZHU Jing,TIAN Jie,LIU Guan-xin,LU Rong,LIN Jian-ping,LIU Jian-ping. Construction of RNAi lentiviral vector targeting mouse Islet-1 gene[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2011, 36(2): 170-173 |
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| Authors: | ZHI Shen-shen ZHU Jing TIAN Jie LIU Guan-xin LU Rong LIN Jian-ping LIU Jian-ping |
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| Affiliation: | .Key Laboratory of Developmental Diseases in Childhood,Children’s Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 400014,China |
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