| pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王海东,王占祥,马永会,谭国伟,骆启聪,程鹏.pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达[J].中国实验诊断学,2008,12(3):299-302. |
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| 作者姓名： | 王海东 王占祥 马永会 谭国伟 骆启聪 程鹏 |
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| 作者单位： | 1. 厦门市第一医院神经外科,福建厦门,361001
2. 厦门大学生命科学院发育与肿瘤细胞实验室 |
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| 摘 要： | 目的构建pcDNA3．1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA，RT-PCR法反转录合成CDNA，设计引物，调取目的片段，与pcDNA3．1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α，LB平板筛选菌落，提取质粒。重组质粒pcDNA3．1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后，阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA3．1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ，HindⅢ酶切分析及测序检查，表明真核表达载体构建正确；瞬时转染C6细胞后，免疫细胞荧光染色及蛋白印迹检测表明转染细胞能够表达外源Pygo2基因。结论成功构建了pcDNA3．1-flag-pygo2真核表达载体并能够在真核细胞中进行表达，这为今后研究pygo2基因在胶质瘤中的作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | pygo2基因C6细胞 载体 真核表达 wnt信号 真核细胞 表达载体的构建 vector Construction cell 机制 作用 胶质瘤 研究 基因 转染细胞 荧光染色 免疫细胞化学染色 瞬时转染 真核表达载体构建 检查 酶切分析 核酸内切酶 限制性 结果 |
| 文章编号： | 1007-4287（2008）03-0299-04 |
| 收稿时间： | 2007-06-26 |
| 修稿时间： | 2007年6月26日 |
Construction of eukaryolic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell |
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| WANG Hai-dong, WANG Zhan-xiang, MA Yong-hui,et al..Construction of eukaryolic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell[J].Chinese Journal of Laboratory Diagnosis,2008,12(3):299-302. |
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| Authors: | WANG Hai-dong WANG Zhan-xiang MA Yong-hui |
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| Institution: | WANG Hai-dong, WANG Zhan-xiang, MA Yong-hui, et al. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | C6 cell vector eukaryotic expression wnt signaling |
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