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| hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达 | |
| 引用本文： | 赵紫琴,李兰英,陆凤先,朱学良,朱云娟.hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2008,24(8):785-787. |
| 作者姓名： | 赵紫琴 李兰英 陆凤先 朱学良 朱云娟 |
| 作者单位： | 1. 天津市公安医院检验科,天津,300042 2. 天津医科大学代谢病医院内分泌所 3. 天津医科大学病理生理学教研室 4. 天津医科大学免疫学教研室,天津,300070 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 天津市科技发展基金 |
| 摘 要： | 目的:构建人类促甲状腺激素受体(hTSHR)胞膜外区氨基端的两个片段hTSHRf(aa29 ～100)、 hTSHRe(aa101～278)的真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe, 并在CHO细胞中进行表达.方法:RT-PCR法从人甲状腺正常组织的cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(D)/V5-His-TOPO中, 经酶切、 PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达, RT-PCR扩增转染细胞的cDNA、 Western blot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白水平的表达.结果:RT-PCR分别扩增两个片段的阳性克隆株, 所得片段大小与预期一致, 经Western blot鉴定, 相对分子质量(Mr)分别为11900、 23600左右, 与预期的大小相符.结论:真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe构建成功, RT-PCR和Western blot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达, 为进一步研究pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe在体内的基因表达, 建立Graves'病的动物模型奠定了基础. |
| 关 键 词： | TSH 受体 真核表达 Graves'病 膜外区 真核表达载体 构建和表达 domain TSHR human eukaryotic expression 动物模型 Graves 基因表达 研究 高效表达 重组质粒 检测 相对分子质量 预期 大小 阳性克隆株 结果 蛋白水平 |
Construction and expression of the eukaryotic expression plamids of human TSHR extracellular domain |
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| ZHAO Zi-qin,LI Lan-ying,LU Feng-xian,ZHU Xue-liang,ZHU Yun-juan.Construction and expression of the eukaryotic expression plamids of human TSHR extracellular domain[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2008,24(8):785-787. | |
| Authors: | ZHAO Zi-qin LI Lan-ying LU Feng-xian ZHU Xue-liang ZHU Yun-juan |
| Institution: | Department of Clinical Laboratory, Tianjin Gong-an Hospital, Tianjin 300042, China. |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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