许旺细胞提取与纯化的新方法

背景：许旺细胞移植可改变损伤局部的微环境，有利于神经创伤的修复，获取大量高纯度、具有增殖活性的许旺细胞是研究的关键。 目的：探求一种简单且快速提取和纯化许旺细胞的方法。 方法：实验组大鼠在无菌条件下切断坐骨神经远端，使坐骨神经在体内预变性；对照组大鼠的坐骨神经不予任何处理。术后7 d切取两组坐骨神经，采用混合酶消化、组织块移植法提取许旺细胞；通过低酶消化、2次接种差速贴壁法分离纯化许旺细胞。相差显微镜下观察细胞形态，并行免疫荧光染色鉴定；计算细胞纯度；MTT法检测细胞增殖能力。 结果与结论：实验组培养第7天可见典型呈双极或三极的许旺细胞，细胞间建立连接；对照组细胞突起较短，与周围细胞较少关联。S-100免疫荧光染色后，细胞呈阳性绿色表达。实验组细胞增殖较快，第15天迅速形成漩涡状，成纤维细胞数量相对较少，细胞纯度达96.1%；对照组细胞在培养过程中增殖较缓慢，成纤维细胞数量多，细胞纯度较低。MTT法检测结果显示，原代培养时两组许旺细胞增殖能力均较弱；传代后与对照组比较，实验组许旺细胞增殖能力明显增强(P < 0.05或0.01)，第三四代达峰值。结果证实体内预变性、体外混合酶消化、组织块移植结合低酶消化、双差速贴壁分离许旺细胞是一种简便、快速的提取纯化许旺细胞的方法。

A new method of extraction and purification of Schwann cells