| TAT-NDPK-A蛋白的构建表达及穿膜初步研究 |
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| 引用本文： | 刘秋英,王一飞,熊盛,张美英,钱垂文,何旭君.TAT-NDPK-A蛋白的构建表达及穿膜初步研究[J].中国医疗前沿,2007(9):652-655. |
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| 作者姓名： | 刘秋英 王一飞 熊盛 张美英 钱垂文 何旭君 |
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| 作者单位： | 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 广东省林业学校,广州,510520 |
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| 摘 要： | 目的 构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞.方法 人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上,经IPTG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鉴定分析重组蛋白的抗原性,将TAT-NDPK-A蛋白加入到A549细胞中,荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内.结果 TAT序列与NDPK-A正确融合并插入pET28(a)载体上,经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培养的A549细胞中加入重组蛋白4 h后在细胞内检测到穿膜的蛋白.结论 构建表达TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内,为进一步研究基因的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | TAT 核苷二磷酸激酶A蛋白 融合蛋白 |
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