变异亨廷顿蛋白对CBP组蛋白乙酰化酶活性及其蛋白表达的影响

背景:目前针对转录因子CBP在亨廷顿舞蹈病发病机制中作用的研究主要集中在包涵体形成对CBP的抑制作用。目的:在亨廷顿舞蹈病细胞模型中,探讨变异亨廷顿蛋白对CBP组蛋白乙酰基转移酶活性及CBP蛋白表达的影响。方法:运用可经多西环素诱导表达绿色荧光蛋白标记的HD第一外显子片段含有23个(正常)或74个(变异)多聚谷氨酰胺片段(N-htt-Q23或-Q74)的大鼠肾上腺神经嗜铬细胞瘤PC12细胞模型,用免疫荧光显微镜观察细胞内变异亨廷顿蛋白表达,用免疫沉淀后的内源性CBP进行组蛋白H4乙酰化测定,Westernblot检测CBP蛋白水平,通过外源性加入特异性蛋白酶体抑制剂MG-132,观察其对CBP蛋白水平的影响。用LightcyclerPCR检测CBPmRNA转录水平。结果与结论:多西环素诱导1d时,N-htt-Q74只在少数细胞中形成包涵体,6d时大部分细胞含有包涵体(>90%),而N-htt-Q23始终不形成蛋白包涵体。变异亨廷顿蛋白可抑制CBP组蛋白乙酰基转移酶活性及内源性CBP蛋白水平,但不影响CBPmRNA的转录水平。在表达N-htt-Q74细胞中,MG-132可通过影响蛋白降解部分恢复CBP蛋白水平。结果提示,除了变异亨廷顿蛋白包涵体,可溶性变异亨廷顿蛋白在早期已经开始抑制CBP组蛋白乙酰基转移酶活性和降低CBP蛋白水平,在亨廷顿舞蹈病发病的分子机制中起重要作用。

Effect of mutant huntingtin on the expression levels and histone acetyltransferase activity of CREB-binding protein