| 九眼独活基因组DNA提取、ISSR反应体系优化及引物筛选 |
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| 引用本文： | 王博,侯大斌,徐敏,刘向鸿.九眼独活基因组DNA提取、ISSR反应体系优化及引物筛选[J].西北药学杂志,2010,25(4):265-267. |
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| 作者姓名： | 王博 侯大斌 徐敏 刘向鸿 |
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| 作者单位： | 西南科技大学生命科学与工程学院,四川,绵阳,621010 |
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| 基金项目： | 四川省农作物育种攻关课题，绵阳市重点科技项目 |
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| 摘 要： | 目的探讨九眼独活基因组DNA提取方法、ISSR反应体系优化及引物筛选,为研究九眼独活居群遗传多样性及原药材DNA鉴定奠定基础。方法采用改良的CTAB法与常规CTAB法对九眼独活的基因组进行提取,通过紫外、电泳、PCR-ISSR检测方法进行比较。结果实验表明,改良的CTAB法得到的DNA浓度和纯度较高,并可很好地应用于ISSR分子标记分析;以Mg2+、dNTP、引物和聚合酶建立L9(34)正交设计,并同时考察退火温度和模板浓度,建立适宜的25μLISSR-PCR体系为:模板30ng,Mg2+3.5mmol.L-1,dNTP0.6mmol.L-1,引物0.4μmol.L-1,Taq酶1U。结论以此体系为基础进行引物筛选,在40条ISSR引物中筛选出13条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。
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| 关 键 词： | 九眼独活 DNA提取 ISSR-PCR反应体系 引物筛选 |
DNA isolation, optimization of ISSR-PCR system and primers screening of Aralia cordata Thunb |
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