| 人DRR1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定 |
| |
| 作者姓名： | 赵新宇 聂春来 袁铸 |
| |
| 作者单位： | 四川大学生物治疗国家重点实验室,四川成都,610041 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30800581) |
| |
| 摘 要： | 目的:构建人DRR1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的DRR1表达细胞株.方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG.将PCR扩增的DRRl1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证.用重组质粒pFSIG-DRR1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选DRR1稳定表达细胞株.通过Westernblot鉴定FS-DRR1蛋白的表达.结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-DRR1表达质粒；建立了稳定转染的HEK293细胞系,Western blot检测证明重组DRR1在该细胞系中成功表达.结论:融合有串联亲和纯化标签的DRR1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究DRR1的相互作用蛋白奠定了基础.
|
| 关 键 词： | DRR1 肿瘤抑制基因 肿瘤发生 串联亲和纯化 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
