ARMS技术联合Taqman探针检测100例非小细胞肺癌EGFR基因突变

背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是决定表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)疗效最重要的预测因子,对EGFR基因突变进行检测,对指导患者个体化治疗具有重要意义.EGFR基因突变检测方法有很多,每种方法各有优缺点,本研究拟采用扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)技术与Taqman探针相结合的方法,建立一种能快速、敏感及特异检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的方法.方法 首先,应用Primer Premier 5.0软件在EGFR基因E746 A750和L858R处设计ARMS引物及Taqman水解探针.然后,以包含E746_A750缺失和L858R点突变的质粒为研究对象,进一步分析所建立方法的灵敏度、敏感性以及特异性.最后,用所建立的ARMS-Taqman法检测100例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床标本.结果 在无背景DNA干扰的情况下,ARMS-Taqman法检测灵敏度可达10 copies.对于检测敏感性,在500 copies/μL野生型基因背景下,其敏感性达1％；在5,000 copies/μl野生型基因背景下,其敏感性高达0.1％-0.5％.对于检测特异性,以正常人白细胞DNA为研究对象,21 L858R突变存在一定程度的非特异性扩增,但其最小ΔCt高达14.89,而19 Del未见非特异性扩增.对100份临床标本进行检测,19 Del 21例,21 L858R 18例,总突变率为39.0％.结论 我们所构建的ARMS-Taqman法是一种快速、简便以及具有较高灵敏度和特异性的EGFR基因突变检测方法,值得在临床上进一步推广和验证.

Detection of EGFR Gene Mutations in 100 Non-small Cell Lung Cancer Clinical Samples by a Real-time Polymerase Chain Reaction Method Using Amplification Refractory Mutation System Specific Primers and Taqman Fluorescence Probes