Notch信号通路对肌成纤维细胞转化中α-SMA表达变化的影响

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号后,肌成纤维细胞标志因子α-SMA表达的变化,及Notch信号在肌成纤维细胞转化中的作用.方法 采用胰酶消化法,从新出生2～3 d的SD大鼠肺组织中分离肺成纤维细胞,波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学法鉴定培养至第3代的成纤维细胞的纯度,再将细胞分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组;TGF-β1组及TGF-β1+DAPT组加入5 ng/mL的TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,TGF-β1+DAPT组同时加入500 nmol/L的DAPT抑制Notch信号的表达;分别采用RT-PCR法检测α-SMA的mRNA表达变化,Western-blot法检测α-SMA蛋白的表达变化;采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,两样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 Vimentin免疫细胞化学:几乎100％细胞胞浆内可见棕黄色颗粒及条纹;TGF-β1组α-SMA的mRNA和蛋白的相对吸光度值分别为(0.8510.027)和(0.7850.020),均较对照组(0.3950.018)和(0.3910.022)明显升高;TGF-β1+DAPT组的mRNA和蛋白的相对吸光度值分别为(0.3540.029)和(0.3970.016),均较TGF-β1组显著下降,但与对照组比较无明显差异.结论 TGF-β1可以诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,DAPT可以阻止成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而抑制肺纤维化.