| Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能 |
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| 引用本文： | 周学亮,万力,刘季春. Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能[J]. 中国现代医学杂志, 2013, 23(10) |
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| 作者姓名： | 周学亮 万力 刘季春 |
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| 作者单位： | 南昌大学第一附属医院心脏外科,江西南昌,330006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,江西省研究生创新专项资金 |
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| 摘 要： | 目的 构建Notch 1胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据.方法 设计并合成1对含有BamH Ⅰ和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒.通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达.结果 表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应.结论 真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | Notch信号通路 胞内结构域 质粒构建 H9c2心肌样细胞 |
Construction of eukaryotic expression plasmid for Notch1 intracellular domain and its expression and function in H9c2 cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | notch signaling pathway intracellular domain plasmid construction H9c2 cell |
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