骨形态发生蛋白诱导基因克隆和表达的实验研究

目的：用基因工程技术在大肠杆菌中表达骨形态发生蛋白诱导基因（BMF-2-induced gene 3 kb gene，BIG-3)所编码的蛋白。方法：依据Genbank中BIG-3的基因序列设计并合成引物，从新生小鼠颅骨组织中提取总RNA，通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)得到BIG-3全长编码序列。将所得到的基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2的多克隆位点获得pGEX-4T-2-BIG-3重组表达载体，经测序证实后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，挑选阳性克隆，经诱导表达后SDS-PAGE鉴定。结果：克隆得到BIG-3全长编码序列并在大肠杆菌中表达了GST-BIG-3融合蛋白，融合蛋白约占菌体总蛋白的45．3％。结论：通过RT-PCR从新生小鼠颅骨中克隆到BIG-3基因并在大肠杆菌中获得GST-BIG-3融合蛋白的高水平诱导表达。