辐射损伤的造血千细胞 HPRT 基因突变的研究

利用位于X染色体上的6-氧嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guenine phosphoribosy ltranstrase HPRT)控制基因缺欠时一般不会将介质中与嘌呤碱基结构相似的6-巯基鸟嘌呤(6-thiogu anine,6-TG)掺入到DNA导致死亡的这一特点,研究了辐射引起的小鼠骨髓造血干细胞HPRT基因突变。由于造血干细胞(CFU-S)在骨髓中的含量约为粒—巨噬系定向干细胞GM-CFC数量的1/10,直接进行CFU-S的HPRT基因突变分析会有相当困难,因此采取了确定GM-CFC受照后是否产生这一突变来回推其祖先CFU-S的HFRT基因突变的存在的方法。实验首先采用RPMI-1640培养液进行正常骨髓GM-CFC的离体软琼脂双层培养,培养体系中含马血清35％,用小鼠肺C·M作CSF,浓度为10％,用6-TG进行选择以确定其最适浓度。实验表明,当骨髓有核细胞数为2×1 0~5/皿时,于37℃含