pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响 |
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作者姓名: | 江青山 肖桃源 邓文蓉 沈宝茗 |
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作者单位: | 南华大学附属第一医院,湖南衡阳421001 |
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基金项目: | 湖南省卫生厅科研基金资助项目(B2010-047). |
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摘 要: | 目的构建peDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的eDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与peDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Westernblot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTr法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果peDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(十)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。
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关 键 词: | pcDNA3 1(+)-血清淀粉样蛋白A CNE-2细胞 转染 增殖 |
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