| 日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 李文桂,肖邦忠,罗兴建,陈雅棠,吴成果.日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST的构建及其表达[J].四川大学学报(医学版),2010,41(5). |
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| 作者姓名： | 李文桂 肖邦忠 罗兴建 陈雅棠 吴成果 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学附属第一医院,传染病寄生虫病研究所,重庆,400016
2. 重庆市疾病预防控制中心,重庆,400014 |
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| 基金项目： | 重庆市科委地方病重大专项基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建日本血吸虫重组质粒pET28a-Sj26GST,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST抗原编码基因,克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出676 bp的Sj26GST基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST基因成功插入pET28a中,SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约为36×103的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的26%;Western blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组质粒pET28d-Sj26GST,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.
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| 关 键 词： | 日本血吸虫 重组质粒pET28a-Sj26GST 大肠埃希菌 表达 |
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