| 广西巴马小型猪α-1,3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 郭晓萍,陈时锦,兰干球,蒋钦杨,郭亚芬. 广西巴马小型猪α-1,3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2012, 32(1). DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2012.01.001 |
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| 作者姓名： | 郭晓萍 陈时锦 兰干球 蒋钦杨 郭亚芬 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530005 |
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| 摘 要： | 目的 通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础.方法 根据NCBI上发布的猪α-1,3半乳糖转移酶基因cDNA序列(AF221508),设计合成一对含有 HindⅢ和BamHI酶切位点的特异性引物,以广西巴马小型猪肝脏组织总 RNA为模板进行RT-PCR,所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序;将目的基因与pEGFP-N 1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-GGTA1,通过测序,双酶切鉴定.结果 所克隆的广西巴马小型猪GGTA1基因存在缺失第五外显子(81-116) 的GGTA1序列,序列全长1 080 bp和未缺失第五外显子的GGTA1序列,全序列为1 116 bp.构建两个表达载体(缺失第五外显子 pEGFP-GGTA1-1、未缺失第五外显子pEGFP-GGTA1-2).结论 广西巴马小型猪GGTA1基因存在第五外显子缺失的现象,通过对GGTA1基因克隆序列进行分析以及构建两个真核表达载体,为后面在猪源PK-15细胞中对其进行表达鉴定以及巴马小型猪 α-1,3半乳糖转移酶基因的沉默实验奠定基础.
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| 关 键 词： | 广西巴马小型猪 α-1,3半乳糖转移酶 真核表达载体 表达鉴定 |
Cloning and Identifying Expression Vectors of a-1,3 Galactosyltransferase Gene from Bama Minipig in Guangxi |
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| GUO Xiao-ping,CHEN Shi-jin,LAN Gan-qiu,JIANG Qin-yang,GUO Ya-fen. Cloning and Identifying Expression Vectors of a-1,3 Galactosyltransferase Gene from Bama Minipig in Guangxi[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2012, 32(1). DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2012.01.001 |
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| Authors: | GUO Xiao-ping CHEN Shi-jin LAN Gan-qiu JIANG Qin-yang GUO Ya-fen |
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