动力相关蛋白-1参与糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡

目的探讨动力相关蛋白-1（DRP-1）对糖皮质激素诱导的胰岛13细胞凋亡的影响。方法采用地塞米松（Dex）处理大鼠胰岛13细胞系INS-1细胞，通过亚G1（Sub-G1）法检测细胞凋亡，Westernblotting检测DRP-1的表达。利用四环素诱导表达系统在INS-1细胞构建可诱导表达野生型DRP-1（DRP-1wt）基因和突变型DRP-1（DRP-1 k38A）基因的稳转细胞系，并用细胞免疫荧光和Westernblotting验证强力霉素（Dox）对转染基因的可诱导性。采用TUNEL法分析在Dex处理情况下，DRP-1wt基因或DRP．1k38A基因表达对Dex诱导的胰岛B细胞凋亡的影响，并同时测定相应细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性及细胞内活性氧（ROS）的变化情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。结果不同浓度Dex处理组细胞凋亡率[（15．7±4．2）％、（30．4±3．3）％、（61．6±5．4）％]明显高于未处理组[（3．3±1．3）％，t=6．44、14．07、30．26，均P〈0．05]；200nmol／LDex处理24、48及96h后细胞凋亡率[（10．6±1．2）％、（15．1±4．6）％、（42．6±9．8）％]明显高于处理0h组[（2．4±1．3）％，t=2．99、4．63、14．66，均P〈0．05]。Westernblotting显示Dex可诱导胰岛β细胞DRP-1基因的表达。DRP-1wt基因表达能够显著促进Dex诱导的β细胞凋亡[（53．8±7．2）％比（16．2±3．2）％，t=10．02，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制Dex诱导的B细胞凋亡[（6．2±1．1）％比（14．5±1．8）％，t=10．63，P〈0．05]。DRP-1wt基因表达能够促进Dex诱导的caspase-3活化[（1979±132）比（921±182），t=11．13，P〈0．05]及ROS产生[（772±62）比（290±56），t=13．66，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制了Dex诱导的caspase-3活化[（506±47）比（681±44），t=5．25，P〈0．05]及ROS产生[（235±14）比（309±44），t=3．86，P〈0．05]。结论DRP-1参与了糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡。