体外培养羊骨髓间充质干细胞增殖及表型特征

目的：关于鼠、兔等小动物骨髓间充质干细胞的研究较多，而对大动物骨髓间充质干细胞研究较少。实验拟了解体外培养的羊骨髓间充质干细胞的生物学特性，以便于组织工程研究使用。 方法：实验于2006-01/2007-01在天津市天津医院完成。①实验材料：天津医院动物实验中心提供的健康中国山羊，10月龄，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：抽取羊骨髓5 mL，梯度离心制备单个有核细胞，并接种于无菌的50 mL塑料培养瓶中，培养体系为含体积分数为0.10 FBS的DMEM。利用多孔培养板对培养的骨髓间充质干细胞进行细胞生长曲线测定。选用抗CD44单克隆抗体，应用免疫组化学方法对培养的骨髓间充质干细胞进行表型鉴定。 结果：①培养的骨髓间充质干细胞黏附贴壁、呈纺锤状，并有多个突起。②一般细胞接种密度下的骨髓间充质干细胞，三代细胞生长周期基本一致，均为接种培养后前二三天，生长较缓慢，为生长迟滞期。3 d后细胞生长加速，有一快速增长过程，达到对数生长期，于七八天时，细胞数达最高值，为生长平台期，其后生长速度减缓。③免疫细胞化学染色后显示所培养细胞的细胞膜抗原CD44有阳性表达。 结论：培养的骨髓间充质干细胞具有较强的遗传稳定性和增殖能力，培养的细胞不是骨髓造血干/祖细胞，而是一群均一的间充质干细胞，具有独特的增殖和表型特征。

Proliferation and phenotype characteristics of goat bone marrow mesenchymal stem cells cultured in vitro