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多重PCR/反向线点杂交检测B族溶血性链球菌耐药相关基因的研究
引用本文:曾宪玉,王辉,王玮蓁,段逸群,孔繁荣. 多重PCR/反向线点杂交检测B族溶血性链球菌耐药相关基因的研究[J]. 中华检验医学杂志, 2007, 30(4): 419-423
作者姓名:曾宪玉  王辉  王玮蓁  段逸群  孔繁荣
作者单位:1. 武汉市第一医院皮肤科,430022
2. 2145 Australia,Sydney,Centre for Infectious Diseases and Microbiology,ICPMR,Westmead hospital
摘    要:目的建立和评价多重PCR一反向线点杂交方法(multiplex PCR/reverse line blot hybridization,mPCR/RLS)检测B族溶血性链球菌(GBS)9个耐药及耐药相关基因[erm(A/TR)、erm(B)、mef(A/E)、tet(M)、tet(O)、aphA-3、aad-6、int-Tn和mreA]的方法。方法针对GBS的9个耐药及耐药相关基因分别设计9对引物及寡核苷酸探针。多重PCR同时扩增9个目的基因,获得生物素标记的PCR产物后,反向线点杂交同时检测上述9个基因。为明确mPCR/RLB方法的特异性和敏感性,对其中318株菌株的9个基因分别进行单个基因PCR扩增,比较两种检测方法结果。结果用mPCR/RLB方法成功检测512株GBS分离株的9个耐药相关基因,除8株int-Tn和21株mef单个基因PCR阳性的菌株,RLB结果表现为单探针杂交外,其余菌株所有耐药基因Iu卫检测结果和单个基因PCR完全一致。结论我们建立的多重PCR/RLB方法具有良好的敏感性和特异性,为GBS耐药基因的流行病学调查和监控提供了一个良好的检测工具。

关 键 词:链球菌 无乳 抗生素耐药基因 多重PCR 双杂交系统技术
收稿时间:2006-07-30

Simultaneous detection of nine antibiotic resistance-related genes in Streptococcus agalactiae using multiplex PCR and reverse line blot hybridization assay
ZENG Xian-yu,WANG Hui,WANG Wei-zhen,DUAN Yi-qun,KONG Fan-rong,Gwendolyn L.Gilbert. Simultaneous detection of nine antibiotic resistance-related genes in Streptococcus agalactiae using multiplex PCR and reverse line blot hybridization assay[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2007, 30(4): 419-423
Authors:ZENG Xian-yu  WANG Hui  WANG Wei-zhen  DUAN Yi-qun  KONG Fan-rong  Gwendolyn L.Gilbert
Abstract:
Keywords:Streptococcus agalactiac   Antibiotic resistant gene detection   Multiplex PCR   Two-hybrid system trchniques
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