| pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2真核表达质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 俞艳萍,张松,孔维佳. pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2真核表达质粒的构建及鉴定[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2010, 24(17) |
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| 作者姓名： | 俞艳萍 张松 孔维佳 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科,武汉,430022 |
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| 摘 要： | 目的:构建靶向人ABCG2基因的pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2真核表达质粒,运用RNA干扰下调ABCG2基因在鼻咽癌细胞系CNE-2中的表达,并筛选出其基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法:针对ABCG2基因的mRNA序列设计3个干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,经大肠杆菌扩增,酶切、PCR、测序鉴定,用脂质体法转染鼻咽癌CNE-2细胞,用real-time PCR和Western blot检测ABCG2基因在mRNA和蛋白水平的抑制效果.结果:经测序证实,成功构建pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2真核表达质粒.重组质粒转染CNE-2细胞后,ABCG2基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强,mRNA水平下调75%,蛋白水平下调68%.结论:成功构建以人ABCG2为靶向的pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2的重组质粒.其对鼻咽癌CNE-2细胞中ABCG2的表达具有显著抑制效应,为进一步研究ABCG2在CNE-2细胞中的功能和鼻咽癌的基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 鼻咽肿瘤 RNA干扰 真核表达质粒 |
Construction and identification of eukaryotic plasmid pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2 |
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| YU Yanping,ZHANG Song,KONG Weijia. Construction and identification of eukaryotic plasmid pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2[J]. Journal of clinical otorhinolaryngology, head, and neck surgery, 2010, 24(17) |
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| Authors: | YU Yanping ZHANG Song KONG Weijia |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ABCG2 shRNA |
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