抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其应用

目的 制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定.方法 通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和力检测,纯化mAb后通过间接ELISA、Western blot法对mAb进行特异性检测；将获得的mAb分别作为捕获和检测抗体,经过配对建立检测重组H-FABP的ELISA体系,并初步用于临床血清检测；采用生物信息学分析设计2段HFABP表位,通过原核表达获得其短肽并纯化,通过Western blot法对配对的mAb进行表位鉴定.结果 成功获得4株抗HFABP特异性mAb,亚类分别为IgG2a和IgG2b,抗体效价为1:51 200～1:1024 000,亲和力最高可达到9.02×109 mol/L;经Western blot法和间接ELISA鉴定均能够特异检测重组H-FABP蛋白,经过配对发现mAb 3-H5和1-F10能够检测重组H-FABP,并在其临床血清样本检测中发现正常组和急性心梗组之间H-FABP水平具有显著性统计学差异；通过表位鉴定发现未知表位的mAb 1-F10能够特异识别位点为H-FABP的第86到第133位氨基酸.结论 制备了4株高特异性和高亲和力的抗H-FABPmAb,成功建立了检测临床样本血清中的ELISA体系,并对其表位进行了分析鉴定.

Preparation, epitope analysis and clinical application of monoclonal antibodies against heart-type fatty acid binding protein