鼻腔路径PM2.5暴露致大鼠中耳炎症及听力损伤的研究

目的] 探讨鼻腔路径细颗粒物(particulate matter 2.5，PM2.5)暴露对SD大鼠中耳黏膜组织学改变和炎症水平的影响，以及与听力损伤的联系。方法] 32只无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为8组，正常对照组包括第1、3、5、14天处死的亚组和PM2.5染毒组包括第1、3、5、14天处死的亚组。PM2.5染毒组经软腭正中入路以1 mL·kg-1的剂量于咽鼓管开口处注射15 mg·mL-1的PM2.5悬液，正常对照组注入相同剂量的磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution，PBS)。连续干预7 d，于干预后第1、3、5、14天处死大鼠，进行指标检测。借助电耳镜观察染毒前后大鼠鼓膜形态变化；采用听觉诱发电位仪、声导抗中耳分析仪检测听性脑干诱发电位(auditory brainstem response，ABR)的反应阈值及40 dB nHL声刺激强度下Ⅲ波潜伏期变化、鼓室声导纳值及峰压值变化；酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测中耳灌洗液(middle ear lavage fluid，MELF)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、粘蛋白5AC(mucin-5 subtype AC，MUC5AC)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)表达水平；采用流式细胞术检测灌洗液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的表达水平；苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色观察中耳组织切片组织学变化。结果] 与正常对照组比较，PM2.5染毒组大鼠染毒后第3、5天鼓膜表面充血浑浊，少数耳内可见积液。与染毒前比较，染毒后第3、5天PM2.5染毒组大鼠声导纳值和峰压值显著降低(P＜0.01，P＜0.0001)；ABR反应阈值显著升高(P＜0.01)，40 dB nHL处潜伏期明显延迟(P＜0.05，P＜0.001)。与正常对照组比较，PM2.5染毒组大鼠MELF中IL-6、TNF-α、IFN-γ、MPO、VEGF、MUC5AC表达升高(P＜0.01)，其中IL-6、IFN-γ、VEGF、MPO、MUC5AC水平均于染毒后第5天达到高峰。HE染色显示，与正常对照组比较，PM2.5染毒组大鼠染毒后第3、5天中耳黏膜增厚，炎性细胞浸润明显，第5天尤为明显，第14天各指标趋向正常。结论] 鼻腔路径PM2.5暴露会对大鼠中耳造成急性炎症损伤伴有积液渗出，并引起听力功能下降。

Study of Middle Ear Inflammation and Hearing Loss in Rats Exposed to PM2.5 via Nasal Route