| 人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 刘磊,许淑芬,方艳秋,谭岩. 人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化[J]. 中国老年学杂志, 2008, 28(5): 434-436 |
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| 作者姓名： | 刘磊 许淑芬 方艳秋 谭岩 |
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| 作者单位： | 吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021 |
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| 基金项目： | 吉林省杰出青年资助基金 , 吉林省科技厅国际合作项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的 蛋白,为其临床应用奠定基础.方法 根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SOD cDNA序列.将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,重组质粒经酶切,PCR及测序鉴定正确后,将目的 片段插入原核表达载体PET20 b( )中并转化大肠杆菌DE3,通过IPTG诱导表达出目的 蛋白,经镍固定金属亲和层析纯化.采用邻苯三酚自身氧化法测定SOD生物学活性.结果 序列分析表明SOD基因成熟肽编码区含有465 bp与GenBank(X02317)中已报道序列一致的SOD核苷酸.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示表达的目的 蛋白分子质量约为19 kD并与商品化的人SOD单抗呈特异性反应.经Ni2 -NTA琼脂糖纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.可溶蛋白酶活力达1 300 U/ml.结论 在大肠杆菌中获得了人SOD的高效表达,为研究其生物学功能和广泛应用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 人超氧化物歧化酶 表达纯化 大肠杆菌 人铜锌超氧化物歧化酶 原核 表达载体的构建 蛋白纯化 Cloning human Cu purification expression superoxide dismutase 应用 生物学功能 研究 高效表达 大肠杆菌 酶活力 可溶蛋白 琼脂糖 特异性反应 单抗 商品化 |
| 文章编号： | 1005-9202(2008)05-0434-03 |
| 修稿时间： | 2007-10-30 |
Cloning,expression and purification of human Cu,Zn superoxide dismutase of in E.coli |
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