| HBx基因的真核表达及其对肝癌细胞系HepG2细胞表型的影响 |
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| 引用本文： | 刘玉玲,林巍然,郭英飞,杨冬,姜颖.HBx基因的真核表达及其对肝癌细胞系HepG2细胞表型的影响[J].军事医学,2012(12):907-911. |
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| 作者姓名： | 刘玉玲 林巍然 郭英飞 杨冬 姜颖 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学研究生学院;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京蛋白质组研究中心,蛋白质组学国家重点实验室;空军司令部门诊部 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划资助项目(2011CB910601);国家自然科学基金资助项目(81000192) |
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| 摘 要： | 目的为了探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系,构建HBV X基因(hep-atitis B virus X gene,HBx)真核表达载体及其肝癌(HCC)细胞系HepG2瞬转模型,并检测HBx对HepG2细胞表型的影响。方法以pCMV-HBx为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pcDNA3.1-Flag真核表达载体中,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx,转染至HepG2细胞;Western印迹法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;5-溴尿苷(5-溴脱氧尿嘧啶核苷,5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)标记法检测转染HBx后细胞DNA合成变化;细胞周期检测试剂盒(CycleTESTTMPLUS DNA Reagent Kit)检测转染HBx后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-APC/7-AAD法检测转染HBx后细胞凋亡情况。结果重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该载体的HepG2细胞可检测到HBx蛋白的表达;与转染空质粒pcDNA3.1-Flag的细胞相比,细胞增殖能力增强,而细胞凋亡比率下降。结论成功构建了HBx基因真核表达载体,并研究了HBx对细胞表型的影响,为进一步探索HBx参与HBV引发HCC的分子机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | HBx 肝癌 真核细胞 细胞增殖 细胞凋亡 |
The eukaryotic expression of hepatitis B virus X gene and its effect on the cellular phenotype of HepG2 cell line |
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| Authors: | LIU Yu-ling LIN Wei-ran GUO Ying-fei YANG Dong JIANG Ying |
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| Institution: | 1,2(1.Graduate School,Anhui Medical University,Hefei 230032,China;2.Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing Proteomics Research Center,State Key Laboratory of Proteomics,Beijing 102206,China;3.Outpatient Department of Air Force Headquarters,Beijing 100084,China) |
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