| EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达 |
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| 引用本文： | 胡沙,于利利,李智敏,韩方,吴莉英,黄在菊,王泽华.EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达[J].华中科技大学学报(医学版),2010,39(5). |
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| 作者姓名： | 胡沙 于利利 李智敏 韩方 吴莉英 黄在菊 王泽华 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科,武汉,430022 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系.方法 合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达.结果 测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P＜0.01,差异有统计学意义. 结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础.
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| 关 键 词： | 卵巢癌 RNA干扰 载体构建 |
Construction of EZH2 shRNA Eukaryotic Expression Vector and Its Stable Expression in A2780 Cells |
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| Keywords: | EZH2 |
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