QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞），采用慢病毒转染的方式，构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时，加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况；流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较，砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）；与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较，砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05），与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较，砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05），差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较，砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）；与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较，砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05），与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较，砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较，砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低，Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较，砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高，Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较，砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低，Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05），差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中，QRICH1通过调节NF-κB p65的表达，进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。