| 携带人内皮抑素基因的重组腺病毒构建及表达 |
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| 引用本文： | 马颖,何援利. 携带人内皮抑素基因的重组腺病毒构建及表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12(7): 1268-1271 |
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| 作者姓名： | 马颖 何援利 |
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| 作者单位： | 南方医科大学珠江医院妇产科,广东省广州市,510282 |
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| 摘 要： | 目的:内皮抑素是目前发现的作用最强的内皮细胞抑制因子,但内皮抑素蛋白极不稳定,难以制备及应用,故需要借助基因治疗发挥其抑制血管生成的作用.实验利用AdEasy-1系统构建并鉴定人内皮抑素重组腺病毒,并在人血脐静脉内皮细胞中表达出内皮抑素蛋白.方法:实验于2006-03/10在中山大学生命科学院完成.以Pshuttle-Endostatin质粒为模板,应用特异引物,通过聚合酶链反应扩增纯化得到Endostatin基因片断,经测序鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,再与骨架质粒AdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,重组质粒经筛选、提取、纯化后,经酶切及测序鉴定正确,再大量扩增为腺病毒载体,线性化后利用脂质体2000转染AAV293细胞包装并扩增,得到的病毒液纯化扩增后,感染人脐静脉内皮细胞,反转录-聚合酶链反应检测感染细胞中目的基因的表达,蛋白免疫印迹检测感染细胞中蛋白的表达.结果:获得的Endostatin基因片段经酶切及测序鉴定正确,重组腺病毒质粒经酶切及测序鉴定正确,成功转染AAV293细胞,包装并扩增出病毒液,纯化后测滴度为2.06×1010 pfu/mL,进一步感染人脐静脉内皮细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达.结论:人内皮抑素重组腺病毒pAd-Endo构建成功,且可在人脐静脉内皮细胞中表达出相应的目的基因及蛋白.
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| 关 键 词： | 抗血管生成基因治疗 内皮抑素 腺病毒 人脐静脉内皮细胞 组织构建 人内皮抑素基因 重组 病毒 构建及表达 gene endostatin human recombinant adenovirus expression 蛋白表达 免疫印迹检测 滴度 基因片段 结果 中蛋白 感染细胞 聚合酶链反应检测 反转录 人脐静脉内皮细胞 纯化扩增 |
| 文章编号： | 1673-8225(2008)07-01268-04 |
| 修稿时间： | 2007-09-08 |
Construction and expression of recombinant adenovirus carrying human endostatin gene |
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| Ma Ying,He Yuan-li. Construction and expression of recombinant adenovirus carrying human endostatin gene[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2008, 12(7): 1268-1271 |
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| Authors: | Ma Ying He Yuan-li |
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