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| 抗盐酸克伦特罗人源ScFv抗体筛选与鉴定 | |
| 引用本文： | 马巍娜,贾雷立,刘雪林,宋宏彬,高志贤,钟彦伟,张传福,徐元勇. 抗盐酸克伦特罗人源ScFv抗体筛选与鉴定[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(3) |
| 作者姓名： | 马巍娜 贾雷立 刘雪林 宋宏彬 高志贤 钟彦伟 张传福 徐元勇 |
| 作者单位： | 1. 中国人民解放军疾病预防控制所卫生学评价中心,北京,100071 2. 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 3. 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 目的 筛选盐酸克伦特罗(CLB)人源单链可变区(ScFv)抗体,为研究快速检测试剂(盒)提供基础依据.方法 采用噬菌体表面展示技术,以CLB作为抗原,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗CLB的60个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与CLB结合活性较强的ScFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定SfiⅠ/NotⅠ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XLI-Blue,提取质粒进行DNA序列测定;并对CLB ScFv的编码基因序列分析.结果 经过筛选60个克隆中有15株克隆ELISA的吸光度(A490nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白(BSA)进行交叉反应,确定有7株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-Blue,提取质粒进行DNA序列测定;DNA为750 bp;经BLAST分析,此片段属于新抗体基因序列,GenBank注册号为:EU681272.结论 本实验用噬菌体抗体库技术能够初步获得抗CLB的ScFv抗体,为下一步其特异性亲和力的研究创造了条件. |
| 关 键 词： | 噬菌体表面展示技术 盐酸克伦特罗 人源单链可变区抗体(ScFv) |
Screening and characterization of human phage antibody to clenbulerol (CLB) |
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| Abstract: | |
| Keywords: | |
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