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| 钩端螺旋体vwA1和vwA2基因原核表达产物功能的初步研究 | |
| 引用本文： | 邱文娜,楼永良,严杰,孙爱华.钩端螺旋体vwA1和vwA2基因原核表达产物功能的初步研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2012,32(1). |
| 作者姓名： | 邱文娜 楼永良 严杰 孙爱华 |
| 作者单位： | 1. 325035 温州医学院检验医学院和生命科学学院;310053杭州,浙江医学高等专科学校基础医学部 2. 325035, 温州医学院检验医学院和生命科学学院 3. 浙江大学医学院病原生物学系,杭州,310058 |
| 摘 要： | 目的 构建致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株vwA1和vwA2基因原核表达系统,初步了解目的重组表达产物rVwA1和rVwA2与血小板性出血相关性.方法 采用高保真PCR扩增问号钩体赖株vwA1和vwA2基因并测序,常规方法构建vwA1和vwA2基因原核表达系统.采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rVwA1和rVwA2表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVwA1和rVwA2.采用实时荧光定量RT-PCR检测问号钩体赖株感染人脐静脉内皮细胞株HUVEC前后vwAl-mRNA和vwA2-mRNA水平变化.采用流式细胞术检测rVwA1与人血小板膜糖蛋白结合能力.采用酶切试验及SDS-PAGE观察人血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13水解rVwA2的情况.结果 所克隆的钩体vwA1和vwA2基因与报道的相应基因比较,其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.所构建的vwA1和vwA2基因原核表达系统能分别表达可溶性rVwA1和rVwA2.问号钩体赖株感染HUVEC 8 h后,钩体vwAl-mRNA和vwA2-mRNA水平均显著上调(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,钩体rVwA1与人血小板结合率为60.8％.人ADAMTS13可水解重组人vWF-A2( rhvWF-A2),但不能水解钩体rVwA2.结论 vwA1和vwA2基因可能在钩体感染中发挥作用,其中vwA1基因产物功能与钩体病出血密切相关. |
| 关 键 词： | 问号钩端螺旋体 vwA1基因/vwA2基因 原核表达 血小板/出血 |
Primary study on the functions of prokaryotic expression products of Leptospira interrogans vwA1 and vwA2 genes |
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| QIU Wen-na , LOU Yong-liang , YAN Jie , SUN Ai-hua.Primary study on the functions of prokaryotic expression products of Leptospira interrogans vwA1 and vwA2 genes[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2012,32(1). | |
| Authors: | QIU Wen-na LOU Yong-liang YAN Jie SUN Ai-hua |
| Abstract: | |
| Keywords: | Leptospira interrogans vwA1 gene/vwA2 gene Prokaryotic expression Platelet/hemorrhage |
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