大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离与表型鉴定

目的 探讨阴茎海绵体中肌源性干细胞(MDSCs)的分离与表型鉴定的方法.方法 取2个月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,用0.5％Ⅰ型胶原酶、0.1％胰蛋白酶进行酶消化初步分离.应用改良的Preplate差速贴壁法进一步行细胞纯化,细胞培养1h,贴壁细胞为PP1；未贴壁细胞转瓶培养2h,贴壁细胞为PP2；未贴壁细胞再次转瓶培养18h,贴壁细胞为PP3；此后,每次间隔24h转瓶培养依次获得的贴壁细胞为PP4、PP5、PP6,观察细胞形态变化.流式细胞仪检测PP3、PP6细胞中干细胞抗原l (Sca-l)和结蛋白(Desmin)的阳性表达量；Western blot检测PP1 ～ PP6细胞中Sca-1和Desmin的阳性表达；免疫荧光细胞化学法检测Sca-1、Desmin、Sca-1/Desmin在PP6细胞中的表达.结果 PP1～ PP6细胞贴壁能力逐渐减慢,PP6细胞贴壁最慢,2～3d后才开始贴壁成圆形或短梭形.流式细胞仪检测结果显示,PP3细胞中Sca-1阳性表达量为(0.3±0.2)％,与同型对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),Desmin阳性表达量为(15.3±1.5)％,与同型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；PP6细胞中Sca-1、Desmin阳性表达量分别为(5.7±0.7)％、(41.1±1.6)％,与PP3比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot显示PP1 ～ PP5细胞中未检测到Sca-1蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到Sca-1蛋白的表达,Desmin蛋白在PP1 ～ PP6细胞中表达逐渐增强.免疫荧光细胞化学显示在PP6细胞中有少量细胞表达Sca-1、散在分布、以胞质表达为主；表达Desmin细胞聚集、数量较多、主要表达于胞质；亦发现有极少量双阳性标记细胞(Sca-1/Desmin),共同表达于同一细胞的胞质.结论 在大鼠阴茎海绵体中分离出既有于细胞表型又有肌源性表型的细胞,提示此类细胞为MDSCs.

Isolation and identification of muscle-derived stem cells in the rat penile corpus cavernosum