| 小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析 |
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| 引用本文： | 张燕,江波,张婷,茆勇,高翔,华东. 小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析[J]. 中华实验外科杂志, 2012, 29(3) |
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| 作者姓名： | 张燕 江波 张婷 茆勇 高翔 华东 |
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| 作者单位： | 苏州大学附属第四医院肿瘤科无锡市肿瘤研究所, 无锡,214062 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应(PCR) TLR4检测方法,构建标准曲线,并测定小干扰RNA( siRNA)沉默TLR4的效率.方法 设计TLR4 qPCR扩增引物,以SYBRGreen qPCR master mix,95℃15min,95℃15s,60℃ 1min 50个循环进行扩增,同时1:4稀释阳性对照,构建标准曲线.以65℃为起点,0.5℃为阶梯逐步增加至95℃,于每个温度点测定荧光强度,获得熔解曲线.LipofectamineTM 2000介导不同浓度的siRNA(60、80、100 nmol/L)转染SW480细胞6h后撤除.分别于24、48 h后,使用qPCR检测TLR4 mRNA水平表达变化.结果 (1)SYBR Green定量检测TLR4扩增曲线呈典型S型动力学曲线,扩增效率为100.9％,熔解曲线成单峰,熔解温度为81.5℃.(2) siRNA在24h、80 nmol/L时,TLR4 Ct值为27.72,较未干扰组(25.96)明显增加.(3)琼脂糖凝胶电泳显示转染组(24h、80 nmol/L)在PCR扩增28个循环时不能被检出,而阳性对照则扩增条带清晰.结论 (1) qPCR检测TLR4方法稳定,结果可靠.(2) siRNA浓度80 nmol/L,可对肠癌SW480细胞的TLR4 24 h时的表达水平明显抑制.
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| 关 键 词： | 肠癌 转染 siRNA Toll样受体4 SW480细胞株 |
Analysis of siRNA-mediated toll-like receptor4 silencing in human colon cancer cell line |
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| ZHANG Yan , JIANG Bo , ZHANG Ting , MAO Yong , GAO Xiang , HUA Dong. Analysis of siRNA-mediated toll-like receptor4 silencing in human colon cancer cell line[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2012, 29(3) |
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| Authors: | ZHANG Yan JIANG Bo ZHANG Ting MAO Yong GAO Xiang HUA Dong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Colorectal cancer Transfection siRNA Toll-like receptor 4 SW480 cell line |
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