| 表达mFasL的新型双顺反子逆转录病毒基因转移体系的建立 |
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| 引用本文： | 刘凌波,邹萍,徐之良,王良利,胡中波.表达mFasL的新型双顺反子逆转录病毒基因转移体系的建立[J].华中科技大学学报(医学版),2002,31(2):136-139. |
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| 作者姓名： | 刘凌波 邹萍 徐之良 王良利 胡中波 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所,武汉,430022
2. 武汉大学医学院附属人民医院儿科,武汉,430060 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No. 39770 76 7) |
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| 摘 要： | 为建立表达小鼠 Fas配体 (m Fas L)的内部核糖体进入位点 (IRES)串联的双顺反子新型逆转录病毒基因转移体系 ,用基因重组技术将 m Fas L c DNA基因构建到 IRES双顺反子逆转录病毒载体 (PL XIN)中 ,脂质体法将此重组质粒 PL FIN和空载体 PL XIN分别转染包装细胞 (PA317) ,经 G418筛选出抗性包装细胞克隆 ,基因组 DNA PCR测定基因整合情况。并将抗性 PA317克隆培养上清感染小鼠成纤维细胞系 (NIH3T3) ,筛选出高滴度的 PA317细胞系 ;用流式细胞术测定筛选的 NIH3T3细胞目的基因表达状况 ;以抗性 NIH3T3和 Fas+Yac- 1细胞共培养法检测目的基因的生物学活性。筛选出 12个 PL FIN转染的 PA317细胞克隆中 ,最高产毒效价为 8.5× 10 5CFU(colony- form ing- unit) ;经此上清感染、筛选出的 NIH3T3细胞 ,高表达 m Fas L (阳性率高于对照组 5 2 .5 4% ) ;且能显著诱导 Fas+Yac- 1细胞凋亡 (凋亡率高于对照组 49% )。说明成功建立了表达 m Fas L 的双顺反子逆转录病毒基因转移体系
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| 关 键 词： | 基因转移 细胞凋亡 mFasL 新型双顺反子逆转录病毒 |
| 修稿时间： | 2001年3月12日 |
Establishment of Gene Transfer System by a New Retroviral Vector Containing an Internal Ribosome Entry Site to Link Two Cistons and Expressing Mouse Fas Ligand |
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| Liu Lingbo ,Zou Ping ,Xu Zhiliang et al Institute of Hematology,Xiehe Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan.Establishment of Gene Transfer System by a New Retroviral Vector Containing an Internal Ribosome Entry Site to Link Two Cistons and Expressing Mouse Fas Ligand[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences),2002,31(2):136-139. |
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| Authors: | Liu Lingbo Zou Ping Xu Zhiliang Institute of Hematology Xiehe Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan |
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| Institution: | Liu Lingbo 1,Zou Ping 1,Xu Zhiliang 2 et al 1 Institute of Hematology,Xiehe Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430022 2 Department of Paediatrics,Medical College of Wuhan University,Wuh |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mFasL gene transfer retroviral vector apoptosis |
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