问号钩端螺旋体LipL32-LipL41融合基因的克隆与原核表达

目的构建钩端螺旋体融合基因lip L32-lip L41重组表达质粒,并获得重组表达的融合蛋白。方法设计引物,聚合酶链反应(PCR)从各参考标准株中扩增Lip L32、Lip L41基因,连接引物PCR法构建Lip L32-Lip L41融合基因,连接到大肠杆菌表达载体p ET28a上,构建p ET28a-Lip L32-Lip L41重组质粒,并转化到大肠杆菌DE3菌株中进行诱导表达,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot鉴定融合蛋白的表达。结果扩增获得的Lip L32-Lip L41融合基因为1 900 bp,原核表达重组质粒p ET28a-Lip L32-Lip L41经酶切鉴定含有融合基因片段,在大肠杆菌中表达出Mr 90 000左右的重组融合蛋白Lip L32-Lip L41。结论成功构建钩体Lip L32-Lip L41融合基因,并在大肠杆菌中成果表达融合蛋白,为进一步评价Lip L32-Lip L41作为候选抗原诊断钩端螺旋体病的价值奠定基础。