含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建 |
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引用本文: | 郭超,Alexander,Endler,张敬,石红军,张军.含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建[J].上海铁道大学学报(医学版),2008,29(1):17-20. |
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作者姓名: | 郭超 Alexander Endler 张敬 石红军 张军 |
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作者单位: | [1]同济大学基础医学院生物教研室,上海200092 [2]同济大学生命科学与技术学院,上海200092 |
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摘 要: | 目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。
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关 键 词: | 红色荧光蛋白 DsRed2 RNA干扰 U6启动子 |
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