| 白斑综合症病毒极早期蛋白IE3的原核表达、纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 左华丽,金春英,王蔚.白斑综合症病毒极早期蛋白IE3的原核表达、纯化和鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(4). |
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| 作者姓名： | 左华丽 金春英 王蔚 |
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| 作者单位： | 1. 国家海洋局第三海洋研究所,福建,厦门,361005
2. 华侨大学化工学院,福建,厦门,361021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30800857); 福建省自然科学基金计划项目(2010J05074); 中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室开放基金(LMB101005); 国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室开放研究基金(HY201102) |
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| 摘 要： | 目的:构建对虾白斑综合症的极早期基因IE3的原核表达载体,制备纯化重组蛋白IE3。方法:以感染白斑综合症病毒的对虾心脏组织为模板,PCR法扩增极早期基因IE3基因的编码序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-4T-2-IE3。质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达GST-IE3融合蛋白,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是IE3,DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致。成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-2-IE3,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约33000的具有可溶性的融合蛋白,且Western blot证实确为目的蛋白。结论:成功构建了重组表达载体pGEX-4T-2-IE3,并表达出重组蛋白GST-3。为进一步研究对虾白斑综合症的防治提供了平台。
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| 关 键 词： | 克隆 白斑综合症病毒 极早期蛋白 |
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