| 小鼠p38MAPK重组腺病毒载体的构建及其在成骨细胞系中的表达 |
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| 引用本文： | 白雪东,胡蕴玉,李航,侯黎升,李海峰.小鼠p38MAPK重组腺病毒载体的构建及其在成骨细胞系中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(4). |
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| 作者姓名： | 白雪东 胡蕴玉 李航 侯黎升 李海峰 |
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| 作者单位： | 1. 海军总医院骨科,北京,100037
2. 第四军医大学西京医院,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30772261) |
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| 摘 要： | 目的:利用AdEasyTM system构建携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,感染成骨细胞系MC3T3-E1,检测外源p38MAPK在细胞中的表达。方法:用PCR的方法扩增p38MAPK基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行测序。经BglⅡ和HindⅢ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-CMV-p38MAPK。将经PmeI线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-p38MAPK,再将经PacI线性化的Ad-p38MAPK重组病毒骨架质粒转染AD293包装细胞,包装并扩增病毒。用Ad-p38MAPK感染小鼠MC3T3-E1成骨样细胞,以Western blot法检测p38MAPK在小鼠成骨细胞中的表达。结果:构建并包装表达p38MAPK蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染小鼠成骨细胞系MC3T3-E1并高表达p38MAPK蛋白。结论:成功地构建了携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,为研究p38MAPK在成骨细胞中的作用奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | p38MAPK 腺病毒 成骨细胞 |
The construction of recombinant adenovirus containing p38MAPK gene and its expression in mouse osteoblast-like cells(MC3T3-E1) |
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| BAI Xue-dong,HU Yun-yu,LI Hang,HOU Li-sheng,LI Hai-feng.The construction of recombinant adenovirus containing p38MAPK gene and its expression in mouse osteoblast-like cells(MC3T3-E1)[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2011,27(4). |
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| Authors: | BAI Xue-dong HU Yun-yu LI Hang HOU Li-sheng LI Hai-feng |
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| Institution: | BAI Xue-dong1,HU Yun-yu2,LI Hang2,HOU Li-sheng1,LI Hai-feng1 1Department of Orthopaedics,the Naval General Hospital,Beijing 100037,2Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | P38 mitogen-activated protein kinase(MAPK) adenovirus osteoblast |
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