| 我国地方品种鸡IL-17cDNA的克隆、表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 赵雯,潘志明,耿士忠,方强,丛秋雷,焦新安.我国地方品种鸡IL-17cDNA的克隆、表达及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(4). |
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| 作者姓名： | 赵雯 潘志明 耿士忠 方强 丛秋雷 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州女学,江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30871860BK2010039); 江苏省自然科学基金资助项目(BK2008011); 江苏省高校“青蓝工程”资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性。方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17。将重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%。酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中。重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单...
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| 关 键 词： | 鸡 IL-17 克隆 原核表达 |
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