精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征

目的:观察小鼠精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征,为探讨精原干细胞的多向分化能力提供实验依据。方法:实验于2006-03/2007-01在泸州医学院医学分子生物学实验室完成。①实验材料:生后6～8d左右昆明系小白鼠,雌雄均可,由泸州医学院动物科提供。②实验方法:取7～10d小白鼠双侧股骨和胫骨,制备骨髓基质饲养层。取6～8d雄性小鼠,脱颈椎处死后,无菌取出睾丸,进行精原干细胞分离、培养与鉴定。取培养3d的精原干细胞,分为两组:对照组用基本培养液(IMDM 100U/mL青霉素 100U/mL链霉素 10%胎牛血清)培养,实验组用条件培养液培养(基本培养液中添加50mmol/Lβ-甘油磷酸钠、10-6mol/L地塞米松、50mg/L维生素C、50nmol/L胰岛素、20nmol/L碱性成纤维细胞生长因子)培养。③实验评估:在倒置显微镜下观察细胞的形态学变化、紫外分光光度仪动态检测上清液中碱性磷酸酶活性变化、免疫荧光法检测细胞内Ⅰ型胶原的表达。结果:①细胞形态学特征变化:实验组精原干细胞在成骨条件培养液中较对照组细胞贴壁生长快,条件培养3～6d后见细胞生长迅速,呈集落样增长,细胞立体感增强,但未见明显细胞间桥;诱导培养15d见细胞增殖达高峰,增殖细胞的胞质间桥仍不明显。②Ⅰ型胶原免疫荧光检测结果:实验组细胞浆内出现绿色荧光,呈阳性反应,对照组细胞呈阴性反应。③培养上清液碱性磷酸酶活性变化:实验组与对照组培养上清液中的碱性磷酸酶活性开始很低,以后逐渐增强。实验组培养上清液的碱性磷酸酶活性每个时间段都明显高于对照组(P<0.05)。结论:小鼠精原干细胞在成骨诱导培养条件下能快速增殖,增殖过程中表现出成骨细胞的某些生物学特征,这为进一步研究精原干细胞的多向分化潜能提供实验参考。

Biological characteristics of spermatogonial stem cells cultured in conditions for osteoblasts