阻断PAK1激酶活性对急性巨核细胞白血病细胞分化及凋亡的影响

目的探讨阻断p21蛋白激活激酶1（P21 Activated Kinase 1，PAK1）活性对急性巨核细胞白血病（AMKL）细胞株（CHRF和CMK）增殖、分化和细胞凋亡的影响。方法采用细胞计数法检测PAK1抑制剂（IPA-3和G5555）作用前后AMKL细胞增殖及集落形成能力；应用流式细胞术检测PAK1抑制剂对AMKL细胞周期的影响；Western blot法检测细胞周期蛋白cyclin D1和细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase 3的表达；使用慢病毒介导的shRNA转染技术干扰AMKL细胞中PAK1的蛋白表达水平，应用流式细胞术检测敲低PAK1激酶的活性对AMKL细胞中多倍体DNA形成能力和细胞凋亡的影响。结果PAK1抑制剂以剂量依赖性的方式抑制AMKL细胞的增殖并降低细胞集落形成能力，与对照组相比差异均有统计学意义（P值均<0.05）；PAK1抑制剂降低了S期AMKL细胞的百分比，Western blot法检测显示磷酸化PAK1及cyclin D1的表达水平显著下降（P值均<0.05）；PAK1抑制剂通过上调Cleaved caspase 3表达诱导AMKL细胞凋亡；PAK1抑制剂IPA-3和G5555分别显示出不同的增加巨核细胞中多倍体DNA含量的能力，仅有高浓度的IPA-3及低浓度的G5555可增加多倍体的巨核细胞的数目；敲低PAK1激酶活性，CHRF细胞多倍体DNA含量从14％增至22％，CMK细胞从8％增至16％，凋亡比例分别增至16％和12％（P<0.05）。结论PAK1抑制剂显著诱导AMKL细胞生长停滞并促进AMKL细胞凋亡；敲低PAK1的表达促进多倍体DNA的形成并诱导AMKL细胞凋亡。抑制PAK1的活性可能是控制AMKL的有效方法。