基于网络药理学和实验验证的丹参-红花药对治疗心肌缺血的作用机制探讨

目的 通过网络药理学和动物实验探究丹参-红花药对治疗心肌缺血的潜在作用和机制。方法 检索中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）和文献手动补充确定丹参-红花的活性成分及治疗心肌缺血靶点。以“心肌缺血”及“急性心肌缺血”为关键词，在CTD、DisGeNET、GeneCards和OMIM数据库中检索疾病的潜在靶点。利用Venny 2.1.0将筛选得到的有效化学成分靶点与疾病靶点进行交集，确定丹参-红花药对治疗心肌缺血的作用靶点。将交集靶点信息上传至STRING v11.0，构建活性成分-靶点网络及蛋白质相互作用网络（PPI）。通过DAVID数据库对丹参-红花治疗心肌缺血的靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的富集分析。40只SD雄性大鼠，根据体质量随机分成4组，每组10只，即对照组、模型组、复方丹参滴丸（73 mg·kg^-1·d^-1）组、丹参-红花（生药量16 g·kg^-1·d^-1）组。对照组和模型组大鼠每天ig等量0.9%氯化钠溶液，给药组ig相应剂量的药物，每天1次，共7 d。于第6天，除对照组外，其余各组给药1 h后sc异丙肾上腺素（ISO，85 mg·kg^-1），连续2 d造模。HE染色观察各组大鼠心肌组织病理变化；蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、磷酸化转录激活蛋白3（p-STAT3）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、血小板衍生生长因子A（PDGFA）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）蛋白表达水平。结果 网络药理学筛选得到丹参-红花药对治疗心肌缺血的活性成分91个，靶点246个。PPI网络结果显示主要靶点包括STAT3、MAPK1、JUN、RELA、MAPK3、AKT1、SRC、APP、TNF、PIK3CA、CXCL8、KNG1、IL6、VEGFA、MAPK14、HSP90AA1、MAPK8、EGFR、FOS和IL2等。主要靶点相关的通路涉及血管生成（如HIF-1信号通路和VEGF信号通路）、炎症反应（如NF-κB信号通路和TNF信号通路）和细胞凋亡（如细胞凋亡信号通路和p53信号通路）等。动物实验HE染色结果表明，对照组大鼠心肌细胞正常；模型组大鼠心肌纤维肿胀且有断裂，心肌细胞增宽，局部有明显水肿、渗出、炎性细胞浸润；复方丹参滴丸组与模型组大鼠比较，心肌纤维排列略微紊乱且较窄，病理改变程度有所减轻。丹参-红花组大鼠的心肌纤维排列整齐，细胞形态结构完整，心肌纤维肿胀轻，无毛细血管扩张，接近正常心肌形态。蛋白质免疫印迹检测结果表明，与对照组比较，模型组大鼠心肌组织中HIF-1α、VEGFA、PDGFA和bFGF的蛋白表达水平显著升高（P＜0.05、0.01），p-mTOR和p-STAT3的蛋白表达水平显著下降（P＜0.05、0.01）。与模型组比较，丹参-红花显著上调了p-mTOR、p-STAT3、HIF-1α、VEGFA、PDGFA和bFGF的蛋白表达水平（P＜0.05、0.01）。结论 丹参-红花可能通过上调与血管生成密切相关的蛋白水平来促进急性心肌缺血模型大鼠缺血心肌组织的血管生成，从而改善其缺血性损伤。

Study on mechanism of Salvia miltiorrhiza-Carthamus tinctorius in treatment of myocardial ischemia based on network pharmacology and experimental verification