针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定 |
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引用本文: | 姜永光,赵佳晖,吴春婷,罗勇,贺大林.针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定[J].第二军医大学学报,2009,30(8):965-967. |
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作者姓名: | 姜永光 赵佳晖 吴春婷 罗勇 贺大林 |
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作者单位: | 1. 首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京,100029 2. 首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科,北京,100029 3. 西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,西安,710061 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30872934),北京市自然科学基金(5072019). |
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摘 要: | 目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSUPER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。
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关 键 词: | β-连环素 RNA干扰 shRNA HEK-293细胞 上皮细胞间质转化态 |
收稿时间: | 2009/1/10 0:00:00 |
修稿时间: | 2009/7/16 0:00:00 |
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